Dear all, we are evaluating the cytotoxic effect of plant extracts on HT-29 and HCT116 colon cancer cells. We have determined the IC50 values for each cell line, however, we want also to test those concentrations in the normal colon cells (we are going to use the CCD-33Co cell line) to discard toxic effects on these cells. Which should be the concentrations that we must test in these cells? Some people have suggested us to use up to 3 times the IC50 values but we haven't found documents justifying this. Could you please provide documents or papers indicating suggested concentrations? Thanks in advance for your help.
Estimado Iván,
La práctica habitual consiste en determinar tal y como con las células de cáncer, la CL50 en tu modelo de referencia. Cada experimento, debe ser realizado por duplicado y luego de tres series independientes, es posible realizar una Anova, seguida de pruebas post-hoc, a fin de determinar si hay diferencias estadísticamente significativas en la tolerancia mostrada por cada tipo celular.
Personalmente, no recomiendo adoptar criterios toxicológicos en este tipo de ensayos, pues eso equivale a conferir al experimento, una dimensión no sustentable por abordajes in vitro.
Saludos.
Comprendo la respuesta, pero, por ejemplo, en algunos experimentos a menudo se determina la CL50 en una línea de cáncer, y luego evalúan dicha dosis en células "normales" (keratinocitos, macrófagos, fibroblastos, pre adipocitos, etc.), para decir que la dosis ensayada causa muerte en células de cáncer pero no tiene efectos tóxicos para células "normales". Una colega me explicó que para descartar efectos tóxicos en células normales, había que evaluar hasta 3 veces la concentración CL50 (esto es, 3*CL50, no tres experimentos) pero no me supo indicar alguna referencia que justificara ese pensamiento.
Es eso a lo que me refiero con lo de adoptar criterios toxicológicos. Los alcances de un abordaje in vitro no pueden sustentar la inferencia de inocuidad, así haya una tolerancia 3x superior a la presentada por sus contrapartes de cáncer (atributo que no comparte ningún agente o candidato a quimioterapéutico). Por la sencilla razón de que la toxicidad de un fármaco (o candidato a) debe ser estudiada a escala organísmica y nunca a nivel células aisladas, por su pobre representatividad de una hipotética administración a individuos.
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