Hi everyone,
After going through various questions and comments here on ResearchGate about issues with low absorbance in the cell-free Griess assay (using sodium nitroprusside), I want to share the conditions we’ve used in our lab (see the attached file) to achieve the highest absorbance for the positive control (SNP + buffer).
Here are the common details:
- All samples were incubated for 60 minutes.
- The Griess reagent was freshly prepared as a 1:1 mixture of:
-2% (w/v) sulfanilamide in 5% (v/v) H₃PO₄ (prepared in distilled water) -0.1% (w/v) NED in distilled water
Best regards,
Hola Manuel:
Te suguiero ver el siguiente articulo
https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-83762007000100006
Nosotros usamos una curva de calibración con nitrato de sodio de 0 a 100 uM. Nos ha funcionado de maravilla.
Espero te sea de utilidad esta información
Buena suerte.
Hola Juan Manuel, gracias por la sugerencia y el interés.
La curva de nitrato de sodio suele salir bien de forma general. Sin embargo, se tiende a experimentar dificultades a la hora de obtener absorbancias lo suficientemente elevadas en el control positivo de SNP. Este reactivo, que funciona como generador de NO, no se incluye en experimentos con sistemas celulares, ya que es el propio sistema celular el que genera el NO. El objeto de la discusión es comentar las condiciones que favorecen la liberación de NO por parte de SNP. Saludos y gracias!
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