Good morning! I'm interested to improve recovery of Leishmania parasites from conventional NNN cultures obtained from tegumentary samples. Based on this publication (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22994895) I think supplementation with Alanine/proline can improve considerable isolation of promastigotes... did anybody tested it before? If not, can you suggest me a protocol for implement a pilot experiment using proline/alanine? I have L-alanine (A7627-100G) & L-proline (P0380-100G) and I'm planning to prepare solutions containing both aminoacids at different concentrations with the intention to supplement NNN cultures from the beginning or between days 3-5. Best regards!
Hola Braulio. Los requerimientos nutricionales de los cultivos pueden ser diferentes segun la especie, por tanto,puede que prolina o alanina no te funcionen igual, ( o si!). Por ejemplo un cultivo de L, tarentolae no vive sin L, prolina, pero eso necesariamente no tiene que suceder en otra Leishmania. SI quieres probar los dos puedes montar en una placa de cultivo distintas concentraciones de uno y otro y suministrarlo de manera creciente, y luego evaluas la minima cantidad del aa en cuestion que te aumente la parasitemia segun necesites. Como habitualmente nosotros usamos suero fetal bovino descomplementado como suplemento, lo que hacemos es usar porcientos diferentes del suero cuando se necesita obtener mayor cantidad de parasitos para algun experimento. Otro detalle sencillo es que los cultivos con cierto moviemiento, (cosa q resuelves colocandolos en una zaranda leve), habitualmente crecen mas rapido. Espero algo de esto te sea util. Abrazo desde La Habana
Muchas gracias Ana Margarita! Te escribo al correo en un momento!
Espero verte pronto! Saludos a todos en el IPK!
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