Павел, добрый день!

Нет, в сыворотке крови здоровых людей, не страдающих аутоиммунными заболеваниями не должно быть IgG к кардиолипину. Полученные Вами данные говорят о том, что опыт проведен некорректно. Вам, наверно, следует подбирать разведения кардиолипина при посадке, сыворотки и конъюгата более тщательно.

В том и странность. Микрореакция показала, что сыворотка отрицательная, однако в нашей системе независимо от концентрации кардиолипина  и разведения сыворотки (мы тестировали диапазон в несколько порядков) выявляется положительная реакция. При сорбции кардиолипинового антигена, который используется в микрореакции, ложнопозитивных реакций нет. Конъюгат напрямую с кардиолипином не реагирует. Сигнал ложнопозитивный очень сильный. мы не работали до этого с липидными антигенами и, возможно, не знаем о каких-то их способностях к связыванию IgG или связыванию факторов сыворотки крови, которые связывают IgG.

не могли бы вы пояснить, что значит "микрореакция" и чем она отличается от того метода, которым вы сейчас пользуетесь?  я правильно поняла, вы в свою систему вводили другой антиген и с ним проблем не было? чем ваш антиген отличается от того, который используется в "микрореакции"? может быть вместе что-нибудь придумаем )) мы тоже работали с кардиолипином в составе наших биочипов, но проблем фона у нас не было, правда мы использовали коммерческие препараты кардиолипина... и на сколько сильно вы титровали антиген? хорошо бы от 30мкг/мл до 0,1 мкг/мл с шагом 2-3, а сыворотку до 1:10.000, например. И одновременно подбирать разведение конъюгата. В вашем буфере для инкубации есть какой-нибудь агент, подавляющий неспецифику (БСА, казеин, ПВП)? есть информация в литературе, что присутствие детергентов в буфере для инкубации с образцом только повышает фоновое связывание.

Ольга, большое спасибо за ваши ответы.

Микрореакция - это микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном (КА) (смесью холестерина, лецитина и кардиолипина, эмульгированной холин-хлоридом). Стандартный тест на сифилис. Реакция достаточно специфична, используется повсеместно, сам антиген отечественный. В работе помимо него мы используем Сигмовский кардиолипин (спиртовый раствор). Антитела мы детектировали, сорбируя КА на полистирол и инкубируя с сывороткой больного сифилисом и диагностикумом. Ложнопозитивных результатов не было. Для повышения наглядности мы решили прикупить Сигмовский кардиолипин и сорбировать его. Мы сразу раститровали его примерно в указанном вами диапазоне, сыворотку титровали с шагом 10,  до 1/100000. Разницы между здоровыми и больными не было. В обоих случаях сигнал очень сильный. Все реагенты разводили на фосфатном буфере. Детергент (твин-20) вносили в конъюгат. Блокирование, добавление белков (БСА, казеина, сухого молока)  в диагностикум на сигнал у здоровых не повлияло. После мы сорбировали кардиолипин на нитроцеллюлозу. И вновь с тем же результатом. Мы меняли рН буферов до кислого и щелочного, добавляли детергенты (твин, додецилсульфат натрия), но все равно сигнал был одинаков в пробе у больных и здоровых. В качестве анти-аналита мы используем G белок стрептококка, тоже Сигмовский. Примерно такая ситуация.  

Тогда возможно сам антиген, который вы используете, не достаточно очищен. Насколько я помню, сигмовсикй кардиолипин в растворе имеет степень чистоты что-то порядка 80%... Может быть он содержит какие-то минорные компоненты, которые связывают любые иммуноглобулины. Других вариантов увы я пока придумать не смогла )))

Мы его сейчас проверяем с препаратом IgG, не знаю еще результатов. А покупали мы лиофильно высушенный, в спирте сами разводили. Чистоту вроде 97 или 98 процентов обещали. 

Все таки кардиолипин вяжет IgG неспецифически. Вот он и ответ.