Did you see this paper? http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3455735/

Hello,

          It is very easy protocol for FISH. You have to separated the blastomeres from the embryos then fix on glass sides, dried the slide treat with hypotonic solution then fixative, after that treated with isotonic and inerstitial solution then use the probes as you desire for identification for aneuploidies   in preimplants. But it is some tedious work you have to practice of it regularly.  

Genetikon Blastomer Fiksasyonu (Modifiye)

2.2.BLASTOMERE FIXATION

2.2.1.MATERIALS:

Microscope slides

Falcon Tubes

Glass Pasteur Pipettes

Mouth Pipette

Elmas uçlu cam çizer

Inverted Microscope (Olympus CK40)

Steriomicrocope (Olympus SZX12)

2.2.2 Solüsyonlar

HCl (1 M)

Methanol

Glacial Acetic Acid

dH2O

KCL

Phosfat Buffer Solution (PBS)

Hipotonik Solüsyonu: 100 ml dH2O + 0,559 gram KCl / 37 oC (0.075 M KCl)

: Alternatif Hipotonik solusyonu: (6mg/ml BSA-Bovin Serum Albümin,

%1 sodium citrate-tribasic:dihydrate)

Fiksatif: 3 birim Metanol + 1 birim Asetik asit (altın kural: fiksatif taze hazırlanacak 15-20 dakika tazelikte)

2.2.3 METOD-Fiksasyon için lamlarının hazırlanması

-Fiksasyon yapılacak alan “cam çizer” ile daire şeklinde çizilir.

-Her blastomer için 1 adet olmak üzere lamlar 100 ml’lik şale’nin içine dizilir.

-Şale’de 100 ml dH2O + 1 ml HCl mevcuttur. Lamlar 30 dakika bekletirilir ve şaleden çıkarılıp havada silkelendikten sonra kuruması için kurutma kağıdının üstüne dik olarak yaslanır, oda sıcaklığında bırakılır.

2.2.4 METOD-Fiksasyon

-Temiz bir pedri yada lam üzerine; 2 ayrı PBS damlacığı, 2 ayrı Hipotonik damlacığı konur.

-Biyopsisi yapılmış blastomer; “içine PBS çekilmiş ağız pipeti” ile 1. PBS damlacığının içine taşınır. 5 kez pipetaj yapılır (yağ ve artıklarından temizlemek amacı ile) sonra 2. PBS damlacığının içine bırakılır.

- Boş ağız pipetine 1. Hipotonik damlacığından hipotonik çekilir. 2. PBS damlacığı içindeki blastomer hipotonik çekilmiş ağız pipetine alınır ve 1. Hipotonik damlacığına taşınarak 5 kez pipetaj yapılıp, 2. Hipotonik damlacığına taşınır.

-Blastomer 2. Hipotonik damlacığında 1 (bir) dakika bekletilir. Bu süre aşılmaz.

-İnvert mikroskop altına önceden dairesi çizilmiş ve temiz lam konur. Hipotonik solusyonu içinde bekleyen blastomer mümkün olan en az sıvı ile lamda önceden çizilmiş dairenin içine bırakılır.

-Mikroskopta blastomer görülür.

- Mikroskop ile hipotonik kurumadan hemen önce ayrı bir pipet (ağız pipeti veya mikropipet veya cam pastör pipeti) ile 2 mikrolitre taze hazırlanmış fiksatif, blastomerin üzerine damlatılır.

-Blastomerin; 2. Hipotonik damlacığı içinden minimum sıvı ile fiksasyon lamına taşınması ve üzerine miktar olarak 2 mikrolitre fiksatif damlatılması, “blastomer kaçağını” önlemesi açısından önemlidir. Fiksatif hipotonik içindeki blastomere damlatıldığında, hipotonik solusyonu ve fiksatif karışırken blastomer damlacık içinde hızla hareket edebilir. Bir miktar beklenirse blastomer hareketini durduracak ve lam üstüne fiske olacaktır.

- Fiksatif damlatılırken blastomer sürekli gözlenmelidir. Kuruma aşamasında ikinci, gerekirse üçüncü damla fiksasyon (2 mikrolitre’lik damlalar halinde) damlatılır ve nukleusun apaçık ortaya çıktığı gözlenir. Lam tamamen kurutulur. Lamlar FISH hibridizasyonuna kadar oda sıcaklığında, lam taşıma kutularında, kapağı kapalı temiz şekilde saklanır.

-Lamın etiketlenmesi çok önemlidir. Blastomer numarası vb yazılmalıdır.

Mr Yurdakul I will appreciate very much if you could traslate this protocol to english. 

thank you very much

luis