Dry BSA is rather difficult to dissolve because it likes to clump together, and it probably doesn't help that you are trying to dissolve it at an acidic pH. (Its normal environment is blood at near neutral pH.) I suggest that you add the crystals gradually to the buffer while stirring at a fairly high speed with a magnetic stirrer so that the dry BSA is submerged in the vortex. Allow plenty of time for the dissolution to occur. There will be some foam at the top, which you should leave behind.

Sonication will not break molecular bonds, at least not at the intensities found in standard laboratory sonicators. Excessive heating generated by the sonication could cause protein denaturation, however. The elevated temperature you are using to make the gel could also cause some protein denaturation. Denatured protein tends to clump together and form a solid precipitate, but it will not be crystalline.

to answer the question indirectly:

for the test I conducted:

- no need to use the ultrasound bath to make the gel ;

Tips /advice : To have a relatively homogeneous gel in BSA, grind the "0.1 gr of crystals" of BSA from 276°C to 45-55°C. Do this on a smooth support (such as aluminium foil, or foil left over after using parafilm).

- in the same way, no need to use ultrasound to dissolve the tannins in the solvents (PBS nor acetone: ean (70:30)

More information on the following technique: (​A. E. Hagerman, « Radial diffusion method for determining tannin in plant extracts », J Chem Ecol, vol. 13, no 3, p. 437‑449, mars 1987, doi: 10.1007/BF01880091)

• Radial diffusion :

- the radial diffusion test is not sensitive for tannin concentrations to be tested in the order of mg ;

- there is no impact of the gel quality (BSA vs. BSA+ haemoglobin) on the formation of tannin/albumin precipitates. The perimeters of the circles are easier to read with a white gel;

- PBS and (acetone (70) : water (30)) solvents work. It should be noted that after homogenisation, foam appears with the PBS solvent. This can potentially induce an error on the pipetted volume to be deposited;

- at 1g of mass in 10ml of solvent, after 48H, with 2 drops of 15µl initially deposited, it is possible that the precipitation circles overlap;

- not yet verified by practical calculations but a priori, the thickness of the gel is not important since these are relative expressions of the precipitation activity of the protein in relation to the tannic acid taken as reference.

-Tips /advice : To have a relatively homogeneous gel in BSA, grind the "0.1 gr of crystals" of BSA from 276°C to 45-55°C. Do this on a smooth support (such as aluminium foil, or foil left over after using parafilm).

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

pour répondre indirectement à la question :

pour le test que j'ai réalisé :

- pas besoin d'utiliser le bain à ultrason pour réaliser le gel ;

- Astuce/conseil : pour avoir un gel relativement homogène en BSA, broyer le temps que le gel refoidisse de 276°C à 45-55°C les "0.1 gr de cristaux" de BSA. Le faire sur un support lisse (type feuille d'aluminium, ou feuille restante après avoir utilisé de la parafilm).

- de la même manière, pas eu besoin d'utiliser les ultrasons pour dissoudre les tannins dans les solvants (PBS ni acétone : ean (70 :30)

Compléments d'informations pour la technique suivante : (​A. E. Hagerman, « Radial diffusion method for determining tannin in plant extracts », J Chem Ecol, vol. 13, no 3, p. 437‑449, mars 1987, doi: 10.1007/BF01880091)

• Radial diffusion :

- le test de la radial diffusion n'est pas sensible pour des concentrations de tanins à tester de l'ordre du mg ;

- il n'y a pas d'impact de la qualité du gel (BSA vs BSA+ hémoglobine) sur la formation de précipités tanin/protéines albumine. Les périmètres des cercles sont d'ailleurs plus simples à lire avec un gel blanc ;

- les solvants PBS et (acétone (70) : eau (30)) fonctionnent. Il est à noter qu'après homogénéisation, de la mousse apparaît avec le solvant PBS. Ce qui peut potentiellement induire une erreur sur le volume pipeté à déposer ;

- à 1 g de masse dans 10ml de solvant, au bout de 48H, avec 2 gouttes de 15µl déposés initialement, il se peut que les cercles de précipitation se chevauchent ;

- pas encore vérifié par la mise en pratique des calculs mais a priori, l'épaisseur de gel n'a pas d'importance puisque ce sont des expressions relatives de l'activité de précipitation de protéine par rapport à l'acide tannique pris en référence.

- Astuce/conseil : pour avoir un gel relativement homogène en BSA, broyer le temps que le gel refoidisse de 276°C à 45-55°C les "0.1 gr de cristaux" de BSA. Le faire sur un support lisse (type feuille d'aluminium, ou feuille restante après avoir utilisé de la parafilm).

Reference : (​A. E. Hagerman, « Radial diffusion method for determining tannin in plant extracts », J Chem Ecol, vol. 13, no 3, p. 437‑449, mars 1987, doi: 10.1007/BF01880091)

#radial #diffusion #radialdiffusion #albumine #tanins #medium #gel #quantity #volume #determiningtannin #plant #extract #plantextract