Dear All,
I need a high-quality method/protocol to efficiently extract acylcarnitines from fecal specimens for further LC-MS/MS analysis. This method must be feasible and removes the interfering metabolites and compounds existing in the matrix of stool specimen. In other words, acylcarnitines should be extracted with high degrees of purity. Can you please help me if you have a reliable protocol or SOP in this context?
Thank you so much.
BW
There is no simple and rapid method to extract both short, middle, and long chains acylcarnitines. It is a good choice to perform the Folch method to extract and fractionate the acylcarnitines. A tertiary solvent-based approach like Folch may yield relatively clean, protein and polar molecule-free long and middle-chain acylcarnitines. The chloroform phase (bottom layer) may also be subjected to SPE to get purer targets but some recovery loss can be experienced. Upper MeOH-based supernatant may also be treated in the same way (SPE clean up) to extract short-chain acylcarnitines...
The efficient extraction of acylcarnitines from fecal specimens involves careful sample preparation and extraction methods. Here is a high-quality method that you can consider for the extraction of acylcarnitines:
Materials:
Procedure:
Notes:
- Use glass or polypropylene tubes for sample preparation to avoid contamination.
- Work in a cold environment to minimize degradation of metabolites.
- Adhere to safety guidelines when handling organic solvents.
Always adapt the method to the specific requirements of your study and the equipment available in your laboratory. Additionally, consider consulting relevant literature or collaborating with experts in metabolomics for further optimization of the extraction method.
recoja muestras de heces y almacénelas en condiciones adecuadas, generalmente en condiciones de congelación para evitar la degradación de la muestra. Liofilice las muestras para eliminar la humedad y luego muélalas en forma de polvo para aumentar la superficie y, por lo tanto, mejorar la eficiencia de extracción.
Proceso de extracción:Utilice solventes apropiados (como metanol, acetonitrilo o una mezcla de agua y acetonitrilo) para extraer la muestra. Estos solventes pueden extraer efectivamente la acilcarnitina de las muestras de heces. La extracción puede ser facilitada por calentamiento, asistencia ultrasónica o agitación, lo que ayuda a liberar más acilcarnitina de la muestra.
Purificación:Utilice extracción en fase sólida (SPE) o extracción líquido-líquido (LLE) para purificar el extracto. Este paso ayuda a eliminar impurezas de la muestra y aumentar la concentración de acilcarnitina. Después del proceso de purificación, las muestras pueden ser concentradas mediante evaporación rotativa o concentración al vacío.
Análisis:
El análisis de los extractos generalmente se realiza utilizando cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) o cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS). Dependiendo del método de análisis utilizado, puede ser necesario derivatizar el extracto para mejorar la sensibilidad y precisión de la detección.
Durante todo el proceso, utilice materiales de referencia y muestras de control de calidad para asegurar la precisión de la extracción y el análisis.Finalmente, analice los datos obtenidos con el software apropiado para evaluar cuantitativa y cualitativamente el contenido de acilcarnitina.
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