McCord, J.M. and Fridovich, I. (1969) Journal of Biological Chemistry 244, 6049-6055, wihch uses xanthine and xanthine oxidase as SOD generator and cytochrome C as reporter.

Sagnik Haldar, Indrajit Karmakar, Mainak Chakraborty, Dilshad Ahmad, Pallab Kanti Haldar. Antitumor Potential of Thevetia peruviana on Ehrlich's Ascites Carcinoma−Bearing Mice. Journal of Environmental Pathology, Toxicology and Oncology, 34 (2), 2015, 105-113.

There are several methods for SOD activity assay classically McCord and Fridovich1969using xanthine/xanthine oxidase as a source of superoxide radicalsJ Biol Chem. 244 1969 .Also Kono used nitro tetrazolium blue chloride NBT method  published in Arch.Biochem&Bioph.186 .page 189-195 1978 is work good for all kind of enzyme source you can also use RANSOD kit from Randox company aso work good

By using Superoxide dismutase (SOD) kit sigma aldrich.

According my experience, for determination of SOD activity in tissues, the method of McCord and Fridovich is better than SOD kits

We have used the Cytochrome C- based method published by Flohé & Ötting (1984) that we adapted for 96-well microplates. Here below are infos in French :-)

Let me know if you need translation/help!

Jean-François 

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Principe : cette réaction est basée sur la compétition entre la SOD et le Cytochrome C oxydé  et pour l’O2°- généré par la réaction de l’hypoxanthine avec la xanthine oxydase (XOX). Plus il y a de SOD dans l’échantillon, plus l’O2°- est consommé (7) et moins il y a de Cyt Créduit formé (6). L’absorbance du Cyt Créd est mesurée à 550nm (25°C).

 Hypoxanthine + O2 à acide urique + O2°- (catalysée par la XOX)                                  

O2°- + Cyt Coxidé à Cyt Créd (catalysée par le Cyt Coxidase)                             (6)

 2 O2°- + 2H+ à H2O2 + O2 (catalysée par la SOD contenu dans l’échantillon)             

 Protocole : dans chaque puit, 10µl d’échantillon dilué 10x sont déposés. 10µl de XOX (0,2U/ml) y sont ajoutés. La réaction est initiée par l’ajout de 280µl de milieu réactionnel (tampon phosphate 50mM, pH 7.8, contenant 0.5mM d’EDTA et 0.2mM d’hypoxanthine.

Analyse des résultats : la SOD ayant un pouvoir inhibiteur sur la réduction du cytochrome C par l’O2°-, un étalon est nécessaire. Une unité (U) correspond à 50% d’inhibition de la réaction. Le pourcentage d’inhibition est obtenu par le rapport des pentes de la cinétique, tandis que l’activité finale est calculée grâce à l’équation suivante :Activité = U’ x D, avec U’ qui correspond à l’activité estimée par l’étalon et D le facteur de dilution).

Thanks for your answers

We used RANSOD SOD kit from Randox Company. We adapted to 96 well microplate and results were consistent and reproducible. With this setting, the kit gave us 80  tests per 20 ml reagent  bottle.