Bonjour
je fait des extractions d'exosomes à partir d'urine et de milieu conditionné (cycle d'ultracentrifugation) je passe mes échantillons en microscopie electronique qui me confirme que j'ai des exosomes mais quand je fais un western blot j'arrive à sortir les échantillons extrait à partir des urines mais pas des milieux conditionnés (j'ai testé les ac ALIX CD9 et TSG101)
auriez vous une idée pourquoi je n'arrive pas à sortir mes echantillons issus des milieux conditionnés
en vous remerciant pour votre aide
Hello Brishoual,
It's very interesting that you are unable to detect the exosomes from the conditioned media sample.
The first thing that I would ask is what type of medium did you use when culturing your cells? If you used FBS/FCS then it would need to be vesicle depleted. If you used FCS in your culturing process that has not been depleted the bovine vesicles will cause a problem when you're trying to get a signal. As the bovine vesicles will count towards the amount of protein that you are pipetting into your gel.
An article has been attached to show you how to make vesicle depleted FCS
Article Importance of exosome depletion protocols to eliminate funct...
I hope that this helps. Best of luck with your experiments.
Hi
thank you for your reply
We used Exosome-depleted FBS ...
I think I don't load enought protein...
Bonjour,
est-ce que tu as fait un dosage des protéines avant faire le WB? peut être tu n'as pas unde concentration detectable par WB et tu as besoin d'une méthode plus précise comme MS.
Bon courage!
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