Hi Samar, as compared to the paraffin technique, the resin embedded tissues give, in general, better resolution of details at Light Microscopy, can be cut thinner, produce less artifacts if processed well. On the other hand, the plastic embedded tissues are more difficult to be cut in large blocks (areas ), are more difficult to be stained well (lower range of usable stains), their processing is more elaborate and time consuming - should be cut with special glass or diamond knifes as the resin-embedded tissues are primarily used for Electron Microscopy observations. Dimitri

I would second what Dimitrolos said. Resin embedding and sectioning is a complex task requiring very specialised skills. Paraffin embedding is a lot more routine and can be done by any histology lab. The choice of method for tissue processing is really down to what you want to do exactly - what stains you want to apply, what you want to evaluate, what is the visualisation technique you will be using, etc... You can see the layer of rods and cones on a standard paraffin-embedded section, but you may not have the level of cellular detail needed for whatever it is you want to evaluate.

In general Bouin's is a better fixative than formalin for eyes, but it's a bit more complicated to use. There is also a modified Davidson's fixative that is commonly used for eyes, you can probably find the approach by doing an online search.

Thank you for your answers! I have read studies that used both techniquesfor embedding retina. You are right; the choice of method depends on what you want to do exactly. I have lab experience in the processing of gonad samples (using both embedding media) and subsequent studies of histological examination, I really appreciate your comments on the processing of eyes/retina.

Best regards,

Sámar

Hola Samar. El estudio morfométrico del sistema visual de teleósteos, tal como lo entiendo, se basa en análisis de muestras obtenidas de alevines, juveniles y adultos de túnidos, cada una con un grado relativo de dificultad, que puede considerarse mayor si la población de estudio comprende también estados larvales, para estudiar la diferenciación de la neuroretina durante el desarrollo físico y conductual del espécimen. Este grado de dificultad podría ser diferente por cada especie de túnidos que se adicione al estudio marco.

Para ubicarnos en tu pregunta, debemos considerar que la muestra contiene elementos con diferente índice de dureza como sucede con el tejido nervioso cuando se compara con el cristalino. Lo mismo ocurre si la muestra tiene zonas con tejido óseo. Para obtener buenos resultados el índice de dureza del medio de soporte (parafina, resinas acrílicas o epóxicas) debe ser ligeramente superior al del tejido.

Si el objetivo final es realizar el análisis con microscopía de luz, la parafina da buenos resultados. La resina acrílica (metacrilatos) permite cortes más delgados que la parafina, pero no puede usarse en microscopía electrónica de transmisión (MET). Además, como sucede con la resina epóxica Spurr cuando se usa para MOAR, la muestra debe ser más pequeña que la acostumbrada para trabajar en parafina.

Las resinas epóxicas como Spurr se usan en microscopía óptica de alta resolución (MOAR) y en MET. En este caso, el tipo de fijador es muy importante porque el mismo bloque de resina usado para MOAR puede utilizarse para MET; en otras palabras, como si MOAR fuera una etapa pre-MET. El fijador de Carson es de propósito múltiple: ML, MOAR, Inmunohistoquímica (IHQ) y MET.

Carson, F. L., Martin, J. H., and Lynn, J. A. (1973). Formalin fixation for electron microscopy: a reevaluation. Am. J. Clin. Path. 59, 365-373.

Robinson, G. & Dawson, I. (1979) A formalin fixative for Immunochemical and ultrastructural studies on gastrointestinal endocrine cells. J. Clin. Pathol. 32, 40-45.

McDoweil, EM and Trump, BF (1976) Histologic fixatives suitable for diagnostic light and electron microscopy. Arch Path Lab Med 100, 405-414.

Los fijadores con ácido pícrico (Bouin) se emplean en el estudio de embriones animales o como fijadores de segundo tiempo (post-fijación) por su acción como mordente para tinciones tricrómicas (Masson, Mallory, Gomori). Concuerdo con la opinión de Jean-Martin sobre el fijador de Davidson.

El grupo de Ictiología del Laboratorio de Histoembriología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Militar Nueva Granada, Colombia describe un procedimiento, a la vista en las referencias siguientes, que probablemente se adapte a los objetivos de tu estudio.

Tovar et al. (2009) Histología y morfometría del ojo del pez dulceacuícola Paracheirodon axelrodi (Characiformes: Characidae) Rev. Biol. Trop. (Int. J. Trop. Biol. ISSN-0034-7744) 57 (4), 1107-1118.

https://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-77442009000400016

Tovar et al. (2008) Comparación histológica y morfométrica entre el ojo de Eremophilus mutisii (Trichomycteridae) y el de Oncorhynchus mykiss (Salmonidae). Acta Biol. Colomb. 13 (2): 73-88.

http://www.scielo.org.co/pdf/abc/v13n2/v13n2a5.pdf

Tovar et al. (2013) Histología y morfología del ojo del pez Ariopsis seemanni: Implicaciones en ecología visual. Hidrobiológica 23 (3): 420-430.

http://www.scielo.org.mx/pdf/hbio/v23n3/v23n3a16.pdf

Creo que también vale la pena considerar algunos “tips” sobre procesamiento de este tipo de muestras publicados en diferentes números de la revista Histologic:

Beemer, R. (1986) Preparation of Paraffin-Embedded Sections of the Eye. Histologic 16 (2), 223-224.

https://www.sakuraus.com/getattachment/e8358937-8262-406a-bb74-bd4bd098ebff/542

Asif, M. (1979) Technique to Prevent Collapse of Eye Globe and Detachment of the Retina During Processing. Histologic 9 (2), 129.  https://www.sakuraus.com/getattachment/c051d2f4-21eb-4e53-a9a8-21bd12a1b97f/537

Prophet, E. (1976) Technique for Processing Eye Specimens. Histologic 6 (1), 75-76.

https://www.sakuraus.com/getattachment/49bae96f-e47d-4371-ae12-26be295469fa/528

Nota: la adherencia de los cortes a los portaobjetos puede mejorarse en un 100% si se utilizan portaobjetos cargados electrostáticamente, similares a los empleados en inmunohistoquímica y neurohistología.

Suerte.

Buenas Mario. Efectivamnete queremos analizar muestras de retina de un amplio rango de tallas de individuos. Muchas gracias por tu detallada respuesta y por la bibliografía recomendada, seguro que es de gran ayuda. Saludos, Sámar.